毛細管電泳儀進樣技術要達到标準需要滿足的條件

更新時(shí)間:2018-11-24 &nb弟慢sp;   &nbs長了p;點擊次數:1617
   毛細管電泳儀進樣技術要達到标準需要滿足的條件
  
  毛細管電泳儀工(gōng)作原理
  
  毛細管電泳儀采用并行毛細管電泳(CE)與務紙熒光檢測技術相結合,能夠對DNA和RNA電泳分離檢測。毛細管列陣是并行毛細冷慢管電泳的基礎,根據毛細管列陣的毛細管數量分為(wèi)96和12通畫工(tōng)道,每個毛細管首先注入可導電的分離膠,然後對毛細管兩端去通施加電場,96孔闆中的預檢測樣品開(kāi)始毛細管電泳。依據核自多酸片段長(cháng)度不(bù)同在凝膠電泳中遷移速度不(bù)同的原窗房理核酸樣品被分離檢測。
  
  毛細管電泳儀分析對進樣技術要求很高,進樣操作事項如(機樹rú)下:
  
  一、進樣區帶越小(xiǎo)越好(hǎo):
  
  無論采用何種進樣方式,毛細管插入樣品溶液的深度一般要少唱從于毛細管總長(cháng)度的1%~2%,以盡量減少樣品溶液經毛細吸附嗎那進入毛細管而影響進樣量的性。樣品管中溶液少為(wèi)5μL,進樣體積為(wè暗低i)1~50nL。
  
  二、進樣時(shí)間以短(duǎn)為(wèi)森習宜:
  
  通(tōng)常進樣時(shí)間為(wèi)0.5~1s,此時(紙月shí)毛細管粘附的樣品量相對于吸入的體積影樹可忽略不(bù)計。
  
  雖然毛細管電泳的進樣時(shí)間可至&pl務們usmn;0.1s,但由于毛細管插入樣品管時(shí)不習街(bù)可避免地會(huì)粘附一些溶液,進樣時(shí)間過短(duǎn)光務會(huì)影響分析的重複性。
  
  三、樣品預濃縮:
  
  受毛細管電泳儀毛細管内總體積的制約,對于濃度很稀的樣品,毛細管電泳不舊空(bù)能象HPLC那樣可加大(dà)進樣量來提高檢測靈敏度,但可采取一些措學聽施來改善。
  
  1、當樣品緩沖液的電導明顯低(dī)于(100倍以上如見)電泳緩沖液時(shí),毛細管兩端加上電壓後可在樣品區帶前後形錢可成一個更大(dà)的電場,使樣品溶液中的分子(zǐ)遷移的更快。當這些分鐘些子(zǐ)到達電泳緩沖液邊界時(shí),由于電場減可下弱,遷移速度減慢,使樣品區帶由寬變窄,濃度提高,而達到濃縮的目的。
  
  2、當樣品緩沖液和電極緩沖液的電導一樣,而樣品濃度較稀,不(b舞畫ù)适合再作稀釋時(shí),可在進樣前先吸入一些水,也視司能達到濃縮的目的。
  
  無論采取何種進樣方式,上述方法都可使樣物靜品堆積濃縮。但由于在堆積區帶電勢陡降,會(huì)導緻此區帶溫度升高。裡算
  
  四、毛細管插入樣品溶液後,應立即開(很煙kāi)始進樣操作,完成後迅速移至緩沖液中開(kāi)始學大電泳。否則會(huì)産生毛細作用和虹吸現象,引起誤差并使譜帶展寬。
  
  五、電極不(bù)要和毛細管接觸,樣品貯器(qì)和緩沖液貯海費器(qì)液面的高度應保持平衡。
  
  六、使系統盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度,而影響進樣量的恒定。
  
  七、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶,前者的離子(zǐ)強度應低(dī)于可懂後者。
  
  八、防止樣品溶液和緩沖液蒸發、損耗。
  
  
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